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Olink精准蛋白质组学分析服务

Olink精准蛋白质组学分析服务

产品描述
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Q&A

随着人类基因组测序的完成,医学研究已经从基因组学进入到后基因组时代。蛋白质作为生命活动的功能执行体,其研究价值越来越受到重视。蛋白质生物标志物能够作为病理生理学重要的特征,弥补基因组和表型之间的差距,并对改善未来的医疗保健产生深远影响,特别是在精准医疗方面。但由于缺乏能够提供高特异性、高灵敏度、高通量的技术,进展受到了阻碍。而Olink技术的出现,则可以突破这些阻碍,加速蛋白组学在精准医学领域的发展。

 

技术原理:

Olink蛋白检测平台基于邻位延伸技术Proximity Extension Assay (PEA)对蛋白进行检测,该技术针对每个待检蛋白,都会在其相邻的两个抗原表位设计一对抗体,抗体上偶联有特定的DNA单链,单链末端含有配对碱基,当这对抗体与目标蛋白结合后,处于邻位的两条DNA单链经过杂交互补并在酶促反应下延伸形成双链模板,利用微流控qPCR或NGS对双链模板进行检测,从而可以实现对蛋白的定量分析,该技术巧妙地将蛋白质定量转换为DNA定量,解决了蛋白质不能扩增的问题,因此可以实现对微量蛋白的检测。

 

技术优势:

1.高特异性:两个抗体识别一个蛋白,通过Barcode进行标记和充分验证,特异性强。

2.宽动态范围:整个panel横跨10个log值,可以同时兼顾不同丰度的蛋白。

3.高灵敏度:检测灵敏度低至fg/mL水平,可以在组学水平上检测疾病相关的成百上千种低丰度蛋白(尤其是血浆、血清样本中的低丰度biomarkers)。

4.高检测通量:96/384/3072 panel每个panel一次可以检测88个样本,基于qPCR和NGS高通量检测平台,每周可产出上百万个蛋白数据。

5.微量样本:1μL血浆中可以同时检测48—384种蛋白标志物,8μL血浆中可以检测3000多种蛋白标志物。

6.高重复性:质控严格,99.8%的蛋白无交叉反应,检测平台成熟,数据质量高,重复性好,适合大数据分析要求和临床转化应用的重复性要求。

 

应用领域:

生物标志物研究:疾病风险评估、疾病分型、疾病预测、疾病诊断与预后;

药物研发:药物靶点发现、临床治疗效果评价、基础研究。

 

Olink产品流程图:

 

服务项目表:

案例一:Olink技术用于监测健康和疾病的下一代血浆蛋白质组分析

文献名称:Next generation plasma proteome profiling to monitor health and disease

发表日期:2021年05月

发表期刊:Nature Communications (IF=14.9,Q1)

样本类型:血浆

应用技术:Olink蛋白组学技术(Olink Explore 1536 / Olink Target 96)

文章概述:

本文通过引入基于NGS的Olink Explore 1536-plex检测方法,与基于qPCR的Olink Target 96检测方法进行对比确认检测结果的一致性。并将血浆蛋白谱与全基因组进行关联分析确认蛋白差异的稳定性。通过对健康与二型糖尿病(T2D)队列的血浆蛋白谱进行分析发现相关蛋白标志物,并确认可与临床检测指标关联,用于识别T2D高危人群并对T2D患者的二甲双胍治疗反应进行分层,提供用药指导。

与二型糖尿病相关的蛋白

与二甲双胍治疗反应相关的血浆蛋白

 

案例二:单细胞转录组学结合间质液蛋白组学可明确特应性皮炎的细胞类型特异性免疫调节

文献名称:Single-cell transcriptomics combined with interstitial fluid proteomics defines cell type-specific immune regulation in atopic dermatitis

发表日期:2020年04月

发表期刊:The Journal of allergy and clinical immunology (IF=10.79,Q1)

样本类型:皮肤水泡

应用技术:Olink蛋白质组学技术(inflammation、immune response、neurology panels),单细胞转录组

文章概述:

特应性皮炎(AD)是最常见的慢性炎症性皮肤病,影响高达20%的儿童和7%-10%的成年人,因人群而异。缺陷皮肤屏障和异常免疫激活都是特异性特征,但它们之间的确切相互作用仍不完全清楚。以TH2为中心的炎症是已知的关键致病因素之一,杜皮鲁单抗的临床疗效证明了这一点。杜皮鲁单抗是一种最近被批准用于治疗中重度AD的IL-4受体a阻滞剂。然而,仅30%接受杜皮鲁单抗治疗的AD患者的湿疹面积和严重程度指数减少了90%,甚至广泛作用的免疫抑制剂(如环孢素平台)的平均疾病改善率仅为70%左右,表明已知免疫轴以外的途径一定是导致疾病的相关因素。重要的是,动物模型只能反映AD的某些方面,因此,通过对人体组织进行研究来进一步认识和了解AD是必不可少的。

作者从转录组学和蛋白质组学两个层面对AD进行表征,研究发现与健康对照组相比,在TH2和TH22细胞中分别发现了AD典型细胞因子如IL13和IL22的特征性上调,但在增殖性T细胞和自然杀伤性T细胞中也发现了这些介质,它们也表达抗菌细胞因子IL26。总的来说,不是T细胞,而是髓样细胞在AD中富集最为强烈,作者在AD泡罩液蛋白质组分析中发现树突状细胞(CLEC7A、双调蛋白、EREG)和巨噬细胞产物(CCL13)在最为显著上调的蛋白中。这些数据表明,与传统活检相比,采用抽吸起泡技术具有多个优势,包括更好的皮肤细胞转录组分辨率,结合来自间质液的蛋白质组信息,揭示形成AD细胞和蛋白质组微环境的新型炎症因素。

研究概览图

样本NPX总览

上图以箱线图的方式展示了所选panel中所有样本的NPX值分布,其中蓝色代表样本质控pass的样本。

IQR质控图

上方点阵图的呈现中无明显离群分布的样本,即没有发现任何样本内数据离散程度异常。

蛋白表达量热图

上图呈现的是所有样本中蛋白质表达情况,每列代表一个样本,每行代表一个种蛋白质,渐变颜色显示样本中蛋白的相对表达量。

蛋白相关性分析热图

上图呈现的是所有蛋白间的相关性,横纵轴均代表每个蛋白,名称显示在底部和右侧,渐变颜色显示样本间pearson相关系数值。

Olink样本处理指南

血清收集:

1.收集全血到血清采集试管中;

2.让血液在室温下凝固,这通常需要15-30分钟。在放置超过60分钟的样品中,凝结的细胞有可能开始溶解;

3.在制冷离心机(2-8℃)中以1000-2000xg离心10分钟,以去除血块;

4.立即将血清转移到干净的管中,每管分装50-200μL;

5.分装好的样本储存在-80℃。

血浆收集:

1.收集全血到市售的抗凝剂处理采集管内(经EDTA,柠檬酸或肝素处理);

2.在制冷离心机(2-8℃)中以1000-2000 x g离心10分钟,以去除血浆中的细胞;

3.立即将血浆转移到干净的管中,每管分装50-200μL;

4.储存在-80℃。

采集管种类及尺寸:

任何指定由于采集血清或血浆的市售采集管均可;

请确保所有样本的采集方式盒采集管种类相一致(同一品牌,同一规格等)。

寄样试管及尺寸:

样品应以耐温、非结合蛋白的塑料制品寄送,例如96孔PCR板,最好是带完整裙边的平板,并使用耐-80℃低温且质量有保证的封膜。

样品体积:

请提供≥40μL的每个样品。建议体积:96孔板:50 μL/样品;Eppendorf试管:100-500 μL/样品。

样品数量:

对于Olink进行的分析,每个受试者/患者只需要一管血浆或血清即可。

样品标记:

用耐温标签或记号笔清楚地标记样品板或试管,例如,一个简单的字母数字代码,以便您以后可以识别("A、B、C"、"1、2、3"或"A1、A2、A3")。

运输温度:

样本通常应在干冰上运输(即抵达时仍应冷冻)。请联系您当地的快递公司,了解有关风险评估和使用干冰进行人体样本运输的详细信息和当地规定。

注:对于其他类型的样本,例如组织和细胞裂解物、细针活检、外泌体、微透析液、支气管肺泡灌洗液、细胞培养基、干血斑、滑液、脑脊液、斑块提取物、尿液、唾液等等的处理指南请联系公司销售获取!

 

样本要求:

样本类型

保存介质

样本量要求

运输方式

血清

冻存管

100~500μL/样品

干冰运输

血清

96孔板

50μL/样品

干冰运输

血浆

冻存管

100~500μL/样品

干冰运输

血浆

96孔板

50μL/样品

干冰运输

 

项目周期:

标准流程从样本接收到数据交付,运转周期约为 2个月(40 个工作日),选择定制化信息分析条目需额外评估项目周期。

注:血清/血浆样本请在采集后1个小时内按照《Olink样本处理指南》完成处理。其他类型样本属于定制化,请与销售人员联系。

 

技术支持服务内容:

1. 根据合同规定完成分析;

2. 提交项目结题报告文档,说明项目完成情况;

3. 分析过程中产生的项目结题报告、下机原始数据以及相关生物信息分析结果文件;

4. 数据交付后 6 个月内,提供免费的项目咨询服务;

5. 最终数据提供后,可继续保留数据 3 个月,如需延长数据保存时间需做费用评估。

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