TCR/BCR测序
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案例解析
结果展示
送样须知
Q&A
①技术介绍
T细胞和B细胞是机体特异性免疫反应中的核心功能细胞，T细胞主要负责介导细胞免疫应答，调节免疫反应的强度和方向，而B细胞主要通过产生抗体来介导体液免疫。这两种细胞对特异性抗原的精准识别，依赖于细胞表面特有的抗原识别受体——T细胞受体（TCR）和B细胞受体（BCR）。
TCR与BCR的多样性互补决定区（CDR3区）是免疫组研究的核心靶点，其结构多样性直接决定了免疫细胞对不同抗原的识别范围。从分子结构来看，BCR重链与TCR β链包括V（可变区）、D（高变区）、J（连接区）、C（恒定区）四个功能区域；BCR轻链与TCR α链则由V、J、C三个区域组成。TCR与BCR的高度多样性，正是通过V（D）J基因重组与重排过程实现的，这一机制使免疫细胞能够精准识别自然界中广泛存在的各类抗原，为机体提供全面的免疫保护。
当TCR或BCR被特异性抗原激活后，对应的T细胞和B细胞群体将启动克隆增殖反应。下一代测序（NGS）技术能够精准捕获并识别出这些增殖的免疫细胞克隆，通过分析TCR/BCR的克隆扩增，不仅可以在临床上进行精准诊断和动态监测，还可以助力构建标准化免疫组遗传数据库，揭示TCR和BCR的克隆变化与疾病发生、发展与预后的联系，为免疫相关疾病的研究与诊断提供核心技术支撑。
②技术路线
③测序策略：NovaSeq6000 PE150
④测序深度：推荐4G
⑤交付周期：20个工作日
⑥产品优势
1.低起始量建库：可从低至100ng的RNA或极少量细胞中构建高质量测序文库，大幅降低样本起始量要求，有效打破稀缺、微量样本的测序研究限制；
2.多平台辅助：可流式分选技术提供专业细胞特异性分选前处理，精准提纯目标细胞，大幅提升测序样本纯度与均一性，完美适配高端精准科研研究场景。
通过TCR测序实现鼻咽癌的早期检测
研究背景：
鼻咽癌（NPC）是一种与EB病毒（EBV）高度相关的恶性肿瘤，尤其在华南和东南亚地区高发。由于早期症状不明显，超过80%的患者确诊时已处于中晚期，错过了最佳治疗时机。目前，EBV抗体检测虽用于筛查，但假阳性率高，特异性不足；传统组织活检具有侵入性，而现有影像学方法对早期病灶灵敏度有限。近年来，T细胞受体（TCR）测序技术的发展为癌症早期检测提供了新思路。
研究对象：
研究团队对来自中国南方地区的720名受试者（包括228名鼻咽癌患者、241名EBV血清阳性高风险个体和251名血清阴性健康人）进行了外周血TCR的β链深度测序。
研究方法：
研究团队基于高通量测序的TCR β链CDR3区域分析技术，对患者外周血中T细胞克隆进行深度测序，通过比对分析，筛选出在鼻咽癌患者中显著富集的208个CDR3 序列，并构建了名为“T-score”的TCR特征评分系统。该评分基于个体TCR repertoire中这些富集序列的数量，实现对鼻咽癌发病风险的量化评估。
研究成果：
1.T-score评分系统建立：研究团队鉴定出208个在鼻咽癌患者中显著富集的CDR3 β序列，这些特异性TCR序列在患者组中的平均出现频率达到8.31%，显著高于低风险对照组的2.22%和高风险组的1.9%，基于这些特征性TCR序列研究团队建立了T-score评分系统，T-score显示出很高的风险预测能力。
2.T-score诊断效能验证：通过对34例后来确诊为早期鼻咽癌的志愿者基线血样分析，动态监测数据表明，T-score在确诊前3-12个月就开始显著升高，其预测准确性显著优于传统的VCA-IgA抗体检测，为鼻咽癌的早期预警提供了新的有效手段。
3.抗原特异性发现：研究发现这些TCR既能够靶向EBV抗原，也能够识别非EBV的肿瘤自身抗原。HLA关联分析显示45个TCRβ序列与特定的HLA-I类等位基因显著相关。研究人员通过trogocytosis技术成功鉴定出TCR-ID1识别的具体抗原表位，为免疫治疗应用提供了重要的靶点信息。
TCR检测鼻咽癌的研究路线
这项研究不仅为鼻咽癌的早期筛查提供了超越传统抗体和ctDNA检测的新思路，其发现的特异性TCR序列本身也具有巨大的免疫治疗潜力，可用于开发TCR-T细胞疗法或癌症疫苗。
参考文献：
Zhang S, Zhou Y, Liu Z, et al. Immunosequencing identifies signatures of T cell responses for early detection of nasopharyngeal carcinoma. Cancer Cell. 2025 Aug 11;43(8):1423-1441.e10. doi: 10.1016/j.ccell.2025.04.009.
TCR/BCR测序送样标准
PBMC
≥ 1×10⁶个细胞 / 样本，细胞活率 ≥ 80%，无明显红细胞、血小板污染，离心沉淀后，去除上清，干冰/液氮速冻寄送，避免反复冻融
分选细胞
建议送样量：≥ 2×10⁴ 个细胞/样本，分选纯度越高越好，建议 ≥ 90%，细胞活率 ≥ 85%，离心收集细胞沉淀，去除分选缓冲液，液氮速冻后干冰运输
全血样本
根据下游实验分为两类：
≥ 1 mL新鲜全血，EDTA-K₂ 抗凝（禁止肝素）室温运输，24 h内送达并分离PBMC
≥ 1 mL PAXgene Blood RNA Tube，严格按 PAXgene 标准流程采血、颠倒混匀，室温静置2 h后 2–8℃ 暂存，干冰/冰袋运输
RNA 样本
≥ 1 μg 总 RNA，浓度 ≥ 50 ng/μL，体积 ≥ 20 μL，RIN 值 ≥ 7.0，28S/18S 条带比 ≥ 1.0，无基因组 DNA 污染，无蛋白、盐离子、乙醇残留。RNA溶液干冰速冻，干冰运输，严禁反复冻融
Q1:免疫组库测序的核心检测区域是什么？为什么重点测该区域？
A1:核心检测TCR/BCR 的CDR3区，CDR3是TCR/BCR与抗原结合的核心功能区，由V（D）J基因重排过程中随机拼接、核苷酸插入/缺失形成，具有高度的序列多样性（人类TCRβ链CDR3多样性可达10¹²以上），是反映免疫组库多样性、克隆型特异性的唯一标识。
Q2: 同一份样本多次取样，TCR/BCR结果会有差异吗？
A2:外周血免疫组库存在一定的时间异质性，健康人短期内（1-2 周）取样，多样性指数变异率＜10%，优势克隆型无明显变化；疾病状态下，免疫组库会随病情动态变化，多次取样可反映免疫应答的动态过程。
Q3:bulk免疫组测序和单细胞免疫组测序有什么区别，怎么选择？
A3:根据研究需求来确定适合的方法。Bulk免疫组测序适用于免疫组整体多样性、克隆追踪评估等；单细胞免疫组测序适合与转录组测序联合进行更多基因分析。如需要TCR或BCR双链的准确配对，需要选择单细胞免疫组测序，Bulk免疫组测序不能准确配对双链。
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