Western Blot检测
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案例解析
结果展示
送样须知
Q&A
①技术介绍
Western Blot又称蛋白质免疫印迹，是一种将凝胶电泳的高分辨率分离能力与免疫学检测的高特异性相结合的经典技术。它不仅能验证目标蛋白是否存在，更能提供其分子量大小、相对丰度及特定修饰状态的关键信息。
②技术路线
③产品优势
1.提供分子量信息：可直接判断目标蛋白的分子量是否正确，识别是否存在截短体、降解产物或异常聚合
2.检测翻译后修饰：使用针对磷酸化、乙酰化、甲基化等修饰位点的特异性抗体，直接检测蛋白的功能活性状态
3.抗体特异性验证：是验证一个抗体能否识别单一正确条带的最重要方法，为IHC、IF等后续应用提供信心
4.相对定量与趋势分析：在严格控制上样量和内参的条件下，可可靠地比较不同样本间蛋白表达的上调或下调趋势
④应用范围
1.基础研究：验证基因过表达/敲低后，目标蛋白的表达变化；研究信号通路中关键蛋白的活化（磷酸化）状态
2.疾病诊断：检测疾病特异性蛋白（如异常折叠蛋白）或自身抗体
3.药物开发：评估药物对靶点蛋白表达或磷酸化的影响
样本准备要求
①组织样本：单份≥50 mg，新鲜组织经预冷PBS/生理盐水清洗后分装冻存管，液氮速冻后-80℃保存，避免反复冻融。
②细胞样本：单份≥1×10⁷个，弃培养液后用预冷PBS洗涤1~2次、离心弃上清收集沉淀，-80℃保存，避免反复冻融。
③血液样本-淋巴细胞：采集2~3 mL EDTA抗凝新鲜全血，4℃暂存并在1~2天内分离淋巴细胞，置于-80℃冻存。
④血液样本-血清/血浆：采集2~3 mL新鲜血液（血清无抗凝/血浆加抗凝），4℃暂存并在1~2天内离心分离上清，-80℃冻存备用。
样本寄送要求
所有冻存样本全程干冰密封运输，做好防漏防撞处理，样本编号清晰唯一，随货附带送样信息表，严禁常温、普通冰袋运输及运输过程反复冻融。
Q1：为什么我的检测结果中没有目标蛋白？
A1：可能原因：1.样本中并没表达这种蛋白质；2.样本中的目的蛋白在实验过程中降解，可加入PMSF，抑制蛋白酶活性；3.可能使用的目的蛋白抗体的特异性较差，建议尝试更换抗体。
Q2：我目的蛋白的分子量很小，只有10KD左右，请问能做WB吗？
A2：可以做，可适量增大上样量，尽量选择0.2μm的膜，并缩短转膜的时间，避免时间太长导致转过。
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