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miRNA测序

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技术介绍

miRNA测序，文库构建时引入特异性分子标签（UMI），结合高通量测序实现精准定量，研究某物种某组织在特定时空状态下18-30nt的miRNA片段序列信息，通过与数据库比对，可实现miRNA序列的鉴定、靶基因分析和功能分析。在疾病研究方面，可研究疾病发生调控机制、寻找生物标记、靶向药物研究等。

脂肪组织巨噬细胞分泌的miR-6236增强胰岛素信号并预防肥胖期间的高血糖
研究背景：
随着现代生活方式的改变，肥胖已成为全球性的健康问题，伴随而来的代谢紊乱如胰岛素抵抗、高血糖和高血脂等，严重影响着人们的生活质量。脂肪组织中的巨噬细胞（Adipose Tissue Macrophages， ATMs）在肥胖相关的代谢功能障碍中扮演着关键角色，但其具体机制尚不清楚。

研究方法：
该研究聚焦于miR-6236（肥胖状态下的ATMs分泌的一种真实存在的微小RNA），通过整体或骨髓细胞特异性敲除miR-6236，观察到肥胖相关的脂肪组织胰岛素抵抗、高血糖、高胰岛素血症和高脂血症加剧。miR-6236通过抑制胰岛素信号传导的负调节因子（如PTEN）的翻译，增强脂肪细胞的胰岛素敏感性。

研究结果：

1.对来自饮食诱导的肥胖（DIO）模型的野生型小鼠的体外脂质相关巨噬细胞LAM培养物中纯化的细胞外泌体（EV）进行了miRNA测序，发现miR-6236是LAM来源外泌体中最丰富的miRNA。
2.研究团队创建了miR-6236基因敲除小鼠品系以研究miR-6236在体内的功能，结果表明，与肥胖的WT雄性小鼠相比，DIO KO雄性小鼠表现出更高的餐后和空腹血糖水平、更高的餐后血清胰岛素水平以及更差的空腹葡萄糖耐受性。
3.研究者试图确定人类基因组中是否存在miR-6236的同源基因，发现了一个135核苷酸长的新型pri-miRNA转录本，其能够通过直接结合到人类PTEN mRNA的3' UTR区来抑制其翻译，并在体外增加了胰岛素刺激的葡萄糖摄取.它与小鼠中的miR-6236在分子特性和功能上具有保守性，并与肥胖相关结果相关。
该研究首次揭示了miR-6236作为ATMs分泌的微小RNA，在肥胖状态下增强脂肪细胞胰岛素信号传导并预防代谢功能障碍的重要作用。这一发现不仅增进了我们对肥胖与代谢紊乱机制的理解，也为开发新的治疗策略提供了潜在的靶点，同时也展示了微小RNA在调节代谢过程中的关键作用。

参考文献：

Paneru B D , Chini J , Mccright S J ,et al.Myeloid-derived miR-6236 potentiates adipocyte insulin signaling and prevents hyperglycemia during obesity[J].Nature Communications[2025-05-30].DOI:10.1038/s41467-024-49632-z.

miRNA测序送样标准
组织样本
1.动物组织：内脏组织、脑组织≥0.1g，皮肤、血管等其他组织≥0.3g；
2.培养细胞：数量≥1×10⁶个；
3.全血：≥1 mL 新鲜全血收集的淋巴细胞，≥1 mL Paxgene Blood RNA tube，≥5 mL 加入Trizol后的新鲜全血。

核酸样本
1.动物/人：总量≥1ug，浓度≥50ng/ul，RIN≥7，OD260/280=1.8~2.2，无DNA、蛋白/盐离子等污染，样本无色透明不粘稠
2.植物：总量≥3ug，浓度≥60ng/ul，RIN≥6，OD260/280=1.8~2.2，无DNA、蛋白/盐离子等污染，样本无色透明不粘稠

样本运输
1.组织与细胞样本建议根据送样量使用合适规格带螺纹帽的EP管、冻存管或者离心管装载组织样品，并用封口膜封口；大量样品建议将EP管放置在冻存盒中，并在冻存盒外面包裹气泡垫，干冰运输至实验室。
2.对于血液样品，建议采用5-10ml 塑料抗凝采血管装载，干冰运输至实验室。
3.核酸样品建议使用质量好的1.5ml低吸附EP管装载样品，并用封口膜封口。为了防止样品污染和混乱，请不要使用诸如PCR管、八联管、96孔板、深孔板等非标准管送样，干冰运输至实验室。

Q1：UMImiRNA 测序对样品提取有什么特殊要求？

A1：提取总RNA时建议不要使用过柱试剂盒，也不要使用LiCl沉淀，以免丢失小片段RNA。如果直接提供small RNA样品，可以使用small RNA提取专用试剂盒来进行提取。