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组织病理服务

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送样须知

Q&A

①技术介绍

病理学技术是组织学、病理学等学科用于观察和研究组织与细胞的正常形态及病理变化的常用方法。组织经过固定、包埋和切片制成2-4微米厚的石蜡切片，然后使用不同的染色方法对切片上的组织片进行染色，常规的染色方法包括HE染色，免疫组化，免疫荧光等，染完色的组织切片可在显微镜下清晰观察其组织结构及变化。需同时观察多种蛋白指标的情况时还可采用多重免疫荧光（mIHC）染色的方法进行染色，使用专业设备对切片进行成像，可对蛋白间的互作及相对位置进行观察及分析。

②技术路线

③技术参数

1.样本要求：

样品类型：固定的组织（蜡块/石蜡切片）

样品大小：建议大于3mm×3mm

固定液量：固定液应充分淹没组织，大于组织体积10倍以上为宜

样品运输：可4℃避光运输，切片需放入切片盒中，试剂根据说明书存储条件进行运输

2.切片厚度：石蜡切片厚度为2-4um

3.成像方式：全景扫描成像

4.交付周期：HE染色7个工作日，IHC/IF染色10个工作日，mIHC预实验后20个工作日

④产品优势

1.高清成像：明场及荧光均采用高清数字扫描设备进行全景扫描，扫描结果可任意放大缩小，截取感兴趣的特征局部区域进行单独保存

2.直观的视觉信息：组织切片经染色成像可观察到组织细胞的大小，形状及染色深浅等特征，进一步可根据这些特征的变化情况判断组织的良恶性

3.保留空间信息：可清晰展示病变细胞在组织里的分布模式，排列方式以及与周围正常组织的关系，通过IHC或者mIHC能观察到蛋白在组织原位的分布情况，可以展示空间关系，区分不同细胞亚群，空间分析更能进一步解析蛋白之间的互作情况

癌细胞协同选择器官间神经免疫回路以逃避免疫监视
研究背景：
癌症是一种全身性疾病，癌细胞如何利用远端组织和器官（特别是神经系统）来逃避免疫监视，目前尚不清楚。已知免疫反应（如外周血、肿瘤引流淋巴结TDLNs、脾脏等）对抑制癌症至关重要，癌细胞会利用细胞内、细胞间机制逃避免疫，神经系统在癌症中起重要作用，痛觉神经元是否以及如何在肿瘤微环境之外，调控全身性的抗肿瘤免疫反应？研究团队在头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）患者中发现，肿瘤内痛觉神经密度高与患者术前疼痛负担重相关，这提示疼痛可能不仅仅是癌症的症状，可能与免疫逃逸有关。

研究对象及策略：
研究团队采用了“临床问题导向 + 多维组学验证 + 精细神经调控技术”的综合策略，层层递进：
1.临床关联分析，HNSCC患者队列（回顾性69例，前瞻性80例）；采用多重免疫荧光（mIF）、CODEX技术、血浆蛋白质组学、CyTOF等技术，确立痛觉神经密度、疼痛程度与免疫细胞（特别是TAMs）分布及全身免疫状态的临床相关性。

2.动物模型验证，采用小鼠口腔癌模型，巨噬细胞耗竭模型，在体内验证痛觉神经与免疫细胞的相互作用及其对肿瘤生长的影响。

3.神经调控技术，采用光遗传学：特异性刺激舌部痛觉神经；化学遗传学（Chemogenetics）：特异性抑制淋巴结痛觉神经；神经切除术（RTX/辣椒素），精确操控特定部位（原位肿瘤或引流淋巴结）的神经活动，验证因果关系。

4.分子机制解析，采用单细胞测序（scRNA-seq）、空间转录组（Stereo-seq）、CUT&Tag、钙成像、跨器官谱系追踪，解析癌细胞、神经元、免疫细胞之间的分子对话（ATF4-SLIT2-CGRP-CCL5轴）。

研究成果：
其核心科学发现是揭示了一条全新的跨器官神经免疫环路，该环路被癌细胞主动劫持以实现系统性免疫逃逸。研究阐明了其完整的作用机制：在肿瘤相关巨噬细胞压力下，癌细胞通过ATF4依赖性通路分泌SLIT2蛋白，进而激活支配肿瘤及其引流淋巴结的伤害性感觉神经元；被激活的神经元在淋巴结中释放CGRP神经肽，将这一关键的免疫器官重塑为免疫抑制状态，具体表现为CCL5分泌减少，最终导致肿瘤微环境中促癌的M2样巨噬细胞极化，从而驱动肿瘤进展并削弱免疫检查点抑制剂疗效。该研究不仅深化了对癌症系统性调控机制的理解，开创了“癌症神经科学”的新视角，更重要的是提出了靶向该信号轴（如使用已上市药物Rimegepant）以同时缓解癌痛并增强免疫治疗的潜在联合策略，具有重大的临床转化意义。

参考文献：

10.1016/j.cell.2025.09.029

组织病理服务送样标准
样本信息
1.组织来源：所有待测组织样本都需提供准确的组织类型信息（如黑色素瘤，非小细胞肺癌，结肠癌）和物种信息（种属如人源、小鼠）。
2.标签编号：每个玻片或蜡块实物上面都要标注清晰可辨识的“唯一”编号。

样本类型
1.蜡块或玻片：福尔马林固定的组织或组织芯片TMA等。
2.蜡块或玻片：不能有明显的破损。
3.玻片样本：组织需要紧贴玻片，避免褶皱，玻片不能有破损、划伤或污渍。

组织蜡块
1.组织：应当用10%中性福尔马林或4%的多聚甲醛固定，固定液应充分淹没组织，常温密封避光存放和运输。
2.蜡块：请用封口袋装存，存放或运输温度＜30℃，有清晰明确的编号信息。
3.其他方法固定的样本需要明确注明。

玻片
1.切片厚度应为2~4μm；
2.使用防脱玻片！防脱玻片！（很重要！）
3.正式待测样本最好多准备一套备用玻片。
4.玻片必须完全干透方可运输。
5.每张玻片必须有明确的编号！
6.玻片必须置于专门的玻片盒中，玻片盒上标记清楚编号和单位。
7.可常温避光存放和运输（也可4℃）。

TMA
1.最好可以提供TMA芯点图说明（几行几列）。
2.TMA玻片必须与芯点图相符。
3.最小芯点直径>0.6mm。
4. 使用TMA进行免疫实验，需提供与TMA相同来源的组织切片进行预实验测试。
5. TMA切片必须置于专门的玻片盒中，玻片盒上标记清楚编号和单位。
6.可4℃避光存放和运输。

运输要求
1.不同项目组的样本可以一同运输，但是各自必须放置于单独的包装内，标注清楚：项目编号（客户订单号）\样本编号清单列表\联系人\手机号。
2.蜡块：放置于单独的封口袋内。
3.玻片：置于玻片盒内，标签标注清楚。
4. TMA：置于玻片盒内，提供玻片的编号说明。
5.运输过程，高温可能会导致蜡块融化，请加少量冰袋，做好物理隔离后，使用顺丰等高效率的快递渠道，避免样本在运输途中久置。
6.抗体等试剂根据试剂存储条件存放和运输，一般是4℃或者-20℃。

Q1:最常用的固定液是什么？有什么要求？

A1:常用固定液为4%多聚甲醛，使用时固定液体积最好是组织体积的10倍以上且完全淹没组织。

Q2:石蜡切片常切的厚度是多少？

A2:常规组织切片厚度为3um，脾脏，扁桃体等这些组织细胞密集的建议切2um。

Q3:多重免疫荧光（mIHC）实验有哪些通道可以标记？

A3：可标记的通道有opal480/520/540/570/620/650/690/780/DAPI，这些通道可自由搭配组合，其中不含有opal540和opal650的方案时在全景图片可完全呈现每个通道的信息，含有这两个通道的其中一个或两个时，全景图片为广谱信号的复合图片，不能准确代表每个通道的信息，需采集局部视野后进行光谱拆分才能呈现每个通道的信息。