蛋白质定量分析服务
a.TMT™ 技术
TMT™(Tandem Mass Tag™)技术是由美国Thermo Scientific公司研发的一种多肽体外标记技术，该试剂是专为通过串联质谱(MS)对不同样品中的蛋白质进行鉴定和定量而设计。本技术采用多种同位素的标签，标记多肽的氨基基团，经过LC-MS/MS分析，可同时比较2-16组不同样品中蛋白质的相对含量。
TMT™技术示意图
使用仪器：THERMO ：Orbitrap Eclipse 、Orbitrap Exploris 480、QE plus 高分辨质谱。
技术优势：可同时对2-16种不同条件样品进行蛋白质差异分析。适合广泛样品类型：胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白等。与凝胶分离的蛋白质定量技术相比，TMT质谱定量技术可检测到更多类型的蛋白质分子，如低丰度蛋白质、强酸(碱)性蛋白质、<10KD或>100KD的蛋白质分子。
应用领域：疾病标志物筛选、作用机制研究、植物抗逆研究、药物作用靶点研究、特殊功能蛋白质筛选。
样品要求：
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样品类型 |
样品要求（/组样品） |
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蛋白质提取物 |
浓度 >1μg/μl，蛋白质总量 >300μg |
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细胞样品 |
细胞量>107 |
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组织样品 |
动物、微生物组织湿重>10mg；植物鲜嫩组织>100mg |
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体液样品 |
血液体积>500μl |
项目周期:
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进展 |
时间周期 |
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收样/质控 |
1-2个工作日 |
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样品处理 |
5-6个工作日 |
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质谱上机 |
3-4个工作日 |
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数据分析 |
2-3个工作日 |
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总计 |
不超过20个工作日 |
备注：超过4个样本每增加1个增加5个工作日，如需加急请联系我方协商处理。
b.Label-free
蛋白质非标记定量技术(label-free)是通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析，无需使用昂贵的稳定同位素标签做内部标准，只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据，比较不同样品中相应肽段的信号强度，从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。
Label-free定量蛋白组学实验流程
使用仪器：THERMO ：Orbitrap Eclipse 、Orbitrap Exploris 480、QE plus
技术优势：蛋白质不需要进行标记，所需样品总量少，耗费低。
应用领域：疾病标志物筛选、作用机制研究、植物抗逆研究、药物作用靶点研究、特殊功能蛋白质筛选。
c.SWATH/DIA
SWATH/DIA是一种全新的质谱全景式扫描模式，与传统的shot-gun技术相比，SWATH/DIA采集模式能够将扫描区间内所有的肽段母离子经过超高速扫描并进行二级碎裂，从而获得完整的肽段信息。应用 SWATH /DIA采集模式，一次实验即可获得完整的定量与定性结果，无需进行方法优化。它可以采集样品中所有化合物的信息，可以对所有化合物进行追溯、查询和分析。SWATH/DIA模式克服了shot-gun扫描随机性的问题，因而数据重复性更好。SWATH/DIA尤其适合富集纯化后的样品，比如IP后进行SWATH/DIA定量来检测与目标蛋白互作的蛋白。
SWATH技术示意图
使用仪器：THERMO: Orbitrap Eclipse、Orbitrap Exploris 480、Q Exactive plus; AB SCIEX: TripleTOF 5600 plus
技术优势：
♦ 灵敏度高，它继承了MRM的数据采集模式，结合高分辨率的质谱系统，具有与MRM相当的灵敏度；
♦ 重复样品间的定量相关性可达到0.99以上；
♦ 定量准确度几乎与MRM技术相当；
♦ 定量范围可跨越4个数量级；
♦ 定量的效果非常好。
应用领域：机理和调控机制研究、疾病标志物的筛选、用药及预后标志物筛选、疾病的分子分型。
样品要求：
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样品类型 |
样品要求（/组样品） |
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蛋白质提取物 |
浓度 >1μg/μl，蛋白质总量 >300μg |
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细胞样品 |
细胞量>107 |
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组织样品 |
动物、微生物组织湿重>10mg；植物鲜嫩组织>100mg |
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体液样品 |
血液体积>500μl |
项目周期:
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进展 |
时间周期 |
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收样/质控 |
1-2个工作日 |
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样品处理 |
5-6个工作日 |
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质谱上机 |
3-4个工作日 |
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数据分析 |
2-3个工作日 |
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总计 |
不超过20个工作日 |
备注：超过4个样本每增加1个增加5个工作日，如需加急请联系我方协商处理。
