蛋白定性检测-武汉生物样本库有限公司-建设武汉国家级人类遗传资源库

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蛋白定性检测

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案例解析

结果展示

送样须知

Q&A

①技术介绍

蛋白定性的基本原理是用蛋白酶将蛋白质消化成肽段混合物，用电子轰击或者其他方式使其离子化，形成不同质荷比的带电离子，然后通过质量分析器将具有特定质荷比的肽段离子分离开来。通过实际谱图和该物种理论数据库进行比对，从而进行蛋白定性。该技术适用于胶条或溶液等样本的蛋白定性分析。

②技术路线

③产品优势

1.样本数目不受限制，检测速度快，样本处理简单，通量高

2.较纯或比较单一的胶点、胶条蛋白质样品或相对复杂的蛋白质溶液样本均可

3.准确性和灵敏度高，项目周期短

4.检测产品：蛋白鉴定、蛋白翻译后修饰鉴定

蚕豆种子主要蛋白质的鉴定
研究背景：
蚕豆(Vicia Faba L)因其蛋白质含量高而在人类和动物营养中占有重要地位。更好地了解其种子蛋白质组成，才能培育出满足市场，具有特定品质属性的植物蛋白质需求的品种。

研究对象：
通过SDS-PAGE电泳筛选了35种不同的蚕豆基因型，对三个基因型的35条主要蛋白条带进行了质谱分析。

研究成果：
MS分析表明，大多数分析的蛋白质条带包含一种以上的蛋白质类型，总共鉴定出100多种蛋白质。这些蛋白质包括主要的种子贮藏蛋白，如豆科蛋白以及其他蛋白质类，如脂氧合酶、热休克蛋白、蔗糖结合蛋白、白蛋白和防御素。本文通过蛋白定性分析对蚕豆种子进行种质资源筛选，有助于选择高蛋白质含量和高质量的品种。

参考文献：

Warsame AO, Michael N, O'Sullivan DM, Tosi P. Identification and Quantification of Major Faba Bean Seed Proteins. J Agric Food Chem. 2020;68(32):8535-8544. doi:10.1021/acs.jafc.0c02927

蛋白质组学（质谱）服务项目对样品量的要求
①银染或考染胶条：需条带肉眼清晰可见；
②细胞：需至少1×10⁶个细胞；
③动物组织：蛋白质组学项目需鲜重 100mg；
④植物组织：蛋白质组学项目需鲜重 200mg；
⑤微生物：菌体沉淀>200mg；
⑥体液：血浆/血清>100μL；
⑦外泌体：需要自行抽提外泌体后自行进行 WB，NTA 等指标检测，并建议测定样本蛋白浓度，尽量保证蛋白量大于 200ug 蛋白/样，样本-80℃保存，足量干冰寄送。
备注：对于蛋白得率较低的样品，建议在条件允许的情况下，适当提高样品送样量；特殊样品，请联系公司技术人员协商送样量。

常见样品的准备及寄送流程
①胶条样品：将蛋白条带用干净的刀片切下，并切割为 1mm³ 的小块，装入进口 EP 管中及时送样，送样时需加冰袋维持低温；
②蛋白溶液样品：最好测定蛋白浓度后，干冰寄送液氮速冻的蛋白溶液（需指明缓冲液成分和浓度）；或将蛋白通过 TCA 法或丙酮法沉淀，晾干后，干冰或冰袋寄送；
③细胞、细菌、真菌样品：用预冷的 PBS 缓冲液清洗三次，去除培养基残留成分，清洗结束后，离心将上清弃去，液氮速冻后，-80℃保存，或干冰寄送；
④动物组织样品：取材后冰上操作，迅速将组织剪成长宽高分别为 0.5cm 的小块，用预冷 PBS 清洗三遍，去除残留血液，称重后，液氮速冻，-80℃保存，或干冰寄送；
⑤植物组织样品：新鲜取材后，用预冷的 PBS 将材料表面污物去除，称重后，液氮速冻，-80℃保存，或干冰寄送；
⑥培养基上清液：培养细胞至合适密度，用无血清培养基清洗三遍后，加入无血清培养基继续培养合适时间，收集培养上清，离心去除细胞后，使用 0.22μm 的滤膜过滤，液氮速冻后，-80℃保存，或干冰寄送；
⑦血液样品：血液样品一定避免溶血，要求采集血液时同时制备为血清或者血浆样品，建议使用相应的采血管，之后通过离心的方式获得血清或血浆，按需求分装后，液氮速冻，-80℃保存，或干冰寄送。

Q1：不同类型的植物组织样本，送样时除了满足鲜重要求，还有哪些注意事项？
A1：除需严格遵循鲜重要求（常规蛋白组学≥200mg，磷酸化修饰组学≥1g）外，核心注意事项有3点：
需新鲜采集，采集后立即用液氮快速冷冻，避免蛋白降解；
去除样本表面的杂质（如土壤、灰尘、破损组织），减少污染；
样本包装需密封，标注样本名称、基因型等信息，足量干冰寄送，全程保持-80℃低温，避免反复冻融。对于富含纤维、多酚的植物组织（如叶片、茎秆），无需提前处理，我们会采用专用提取方案，确保蛋白提取效率。

Q2：蛋白定性检测可支持哪些翻译后修饰类型的鉴定？是否需要提前说明修饰类型？
A2：我们的蛋白定性检测可支持多种常见翻译后修饰鉴定，其中磷酸化修饰鉴定是最常用的检测类型。需要提前向我们说明目标修饰类型，原因如下：
不同修饰类型的样本需求量不同（如磷酸化修饰样本需求量远高于常规蛋白定性）；
需针对性调整前处理方案（如磷酸化修饰需进行磷酸酶抑制剂处理，避免修饰位点丢失）；
搜库分析时需设定对应修饰参数，确保修饰位点鉴定的准确性，避免假阳性结果。