ELISA检测

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案例解析

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送样须知

Q&A

①技术介绍

酶联免疫吸附测定法(ELISA)是一种固相免疫测定技术。通过将抗原或抗体固定在固相载体表面,利用酶标记复合物催化底物显色检测体液中的微量物质。

 

②技术路线

 

③产品优势

1.高灵敏度与特异性:可检测pg/mL(皮克/毫升)级别的极低浓度蛋白,抗体双重识别确保极低假阳性

2.精确定量:通过标准曲线直接得出绝对浓度值,数据客观,可比性强

3.高通量:96孔板或384孔板格式,可同时处理数十至上百个样本,适合大规模筛查

4.操作标准化,易于自动化:流程固定,商业试剂盒成熟,易于在实验室和临床检验科推广和实施自动化

5.应用范围极广:适用于血清、血浆、细胞上清、组织裂解液、尿液等多种生物样本

 

④应用范围

1.临床诊断:传染病抗体/抗原检测(如HIV、乙肝)、肿瘤标志物(如CEA、PSA)、激素水平(如HCG)、自身抗体等

2.生物制药:药物效价测定、抗体药物浓度与活性分析、宿主残留蛋白检测

3.科学研究:细胞因子、炎症因子、信号通路蛋白的定量分析

4.食品安全与环境监测:检测食品中的过敏原、毒素(如黄曲霉毒素)、病原体,以及环境中的农药残留

样本量要求
①血清:≥150 μL,无溶血、无脂血、无絮状物、无细菌污染。
②血浆:≥150 μL,采集于指定抗凝管,无凝血块、无溶血、无脂血、无浑浊。
③细胞培养上清:≥300 μL,细胞状态良好,无细菌、真菌污染;无细胞碎片、无悬浮细胞;避免添加含叠氮化钠的培养基。
④动物组织匀浆:≥300 μL,蛋白浓度建议为 0.5–5 mg/mL,添加蛋白酶/磷酸酶抑制剂。
⑤细胞裂解液:≥150 μL,蛋白浓度建议为 1–10 mg/mL,裂解液中避免含高浓度去污剂(如 SDS),会破坏ELISA包被抗体。
⑥FFPE组织洗脱液:≥300 μL,蛋白浓度建议≥0.5 mg/mL,需福尔马林交联充分逆转,无石蜡残留。
 

样本寄送要求
样品收集后立即置于液氮中冷冻5min,-80℃保存,干冰寄送。

Q1:为什么我的样本检测重复性差,两个复孔值相差太大?

A1:可能原因是:1.样品数量多少不一,加样时间有长有短;2.保温时间不一致,洗涤条件不一致,操作不一致;3.加样量不一致;4.不同批号试剂盒组分混用。

 

Q2:为什么标准曲线良好,但样本无检测信号?

A2:可能原因:1.样本中无检测物或检测物含量极低;2.样本中其他物质影响/掩盖检测;3.样本中检测物浓度过高,Hook效应导致假低。