超微量蛋白定量检测-武汉生物样本库有限公司-建设武汉国家级人类遗传资源库

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超微量蛋白定量检测

产品描述

案例解析

结果展示

送样须知

Q&A

①技术介绍

Olink 蛋白检测平台基于邻位延伸技术Proximity Extension Assay (PEA)对蛋白进行检测，该技术针对每个待检蛋白，都会在其相邻的两个抗原表位设计一对抗体，抗体上偶联有特定的 DNA单链，单链末端含有配对碱基，当这对抗体与目标蛋白结合后，处于邻位的两条DNA单链经过杂交互补并在酶促反应下延伸形成双链模板，利用微流控qPCR或NGS对双链模板进行检测，从而可以实现对蛋白的定量分析，该技术巧妙地将蛋白质定量转换为DNA 定量，解决了蛋白质不能扩增的问题，因此可以实现对微量蛋白的检测。

②技术路线

③交付周期：20个工作日

④产品优势

1.高特异性：两个抗体识别一个蛋白，通过Barcode进行标记和充分验证，特异性强

2.宽动态范围：整个panel横跨10个log值，可以同时兼顾不同丰度的蛋白

3.高灵敏度：检测灵敏度低至fg/mL水平，可以在组学水平上检测疾病相关的成百上千种低丰度蛋白（尤其是血浆、血清样本中的低丰度biomarkers）

4.高检测通量：96/Reveal每个panel一次可以检测88/86个样本，HTpanel一次可以检测172个样本，基于qPCR和NGS高通量检测平台，每周可产出上百万个蛋白数据

5.微量样本：10μL血浆中可以同时检测至多5400+种标志物

6.高重复性：质控严格，99.8%的蛋白无交叉反应，检测平台成熟，数据质量高，重复性好，适合大数据分析要求和临床转化应用的重复性要求

⑤Olink产品清单

Olink Explore HT助力卵巢癌类型与分期研究
研究背景：
卵巢癌是妇科恶性肿瘤中死亡率最高的，多数患者确诊时已处于晚期，5 年生存率较低，而早期确诊治愈率可达近 90%。目前缺乏精准分子检测手段，影像学检查存在局限性，许多良性肿瘤患者需接受有创手术诊断，存在并发症风险，现有生物标志物（如 CA-125）对早期肿瘤敏感性不足。

研究对象：
来自瑞典两个独立队列的 404 名女性，其中发现队列 171 人、验证队列 233 人，均因疑似卵巢癌接受手术，最终确诊为良性或恶性肿瘤，包含不同组织学类型和肿瘤分期。

测序策略：
采用高通量邻近延伸分析技术检测 5416 种血浆蛋白，结合肿瘤组织 RNA 测序；以一个队列为发现集，筛选良性与不同分期卵巢癌的差异蛋白，构建多变量风险评分模型，通过另一个队列验证模型性能；分析蛋白与肿瘤基因表达的相关性及蛋白间共表达网络。

卵巢癌蛋白生物标志物候选者的筛选与验证特征

研究成果：
筛选出191种差异蛋白，99.7% 在验证队列中得到复制；构建的8个蛋白生物标志物面板在验证队列中 AUC 达 0.96，敏感性97%、特异性 68%，早期肿瘤敏感性91%，优于CA-125单独检测；仅11%的差异蛋白与肿瘤基因表达显著相关；该面板可区分不同组织学类型和分期的肿瘤，或能减少三分之一良性病例的诊断性手术需求。

Olink送样标准
血清收集
1.收集全血到血清采集试管中；
2.让血液在室温下凝固，这通常需要15-30分钟。在放置超过60分钟的样品中，凝结的细胞有可能开始溶解；
3.在制冷离心机（2-8℃）中以1000-2000xg离心10分钟，以去除血块；
4.立即将血清转移到干净的管中，每管分装50-200μL；
5.分装好的样本储存在-80℃。

血浆收集
1.收集全血到市售的抗凝剂处理采集管内(经 EDTA，柠檬酸或肝素处理);
2.在制冷离心机（2-8℃）中以1000-2000 x g 离心10分钟，以去除血浆中的细胞；
3.立即将血浆转移到干净的管中，每管分装50-200μL；
4.储存在-80℃。

采集管种类及尺寸
任何指定由于采集血清或血浆的市售采集管均可；
请确保所有样本的采集方式和采集管种类相一致（同一品牌，同一规格等）。

寄样试管及尺寸
样品应以耐温、非结合蛋白的塑料制品寄送，例如96孔PCR板，最好是带完整裙边的平板，并使用耐-80℃低温且质量有保证的封膜。

样品体积
请提供≥50μL 的每个样品。建议体积：96孔板：50μL/样品；Eppendorf 试管：100-500 μL/样品。

样品数量
对于Olink 进行的分析，每个受试者/患者只需要一管血浆或血清即可。

样品标记
用耐温标签或记号笔清楚地标记样品板或试管，例如，一个简单的字母数字代码，以便您以后可以识别（"A、B、C"、"1、2、3"或"A1、A2、A3"）。

运输温度
样本通常应在干冰上运输（即抵达时仍应冷冻）。请联系您当地的快递公司，了解有关风险评估和使用干冰进行人体样本运输的详细信息和当地规定。

注：对于其他类型的样本，例如组织和细胞裂解物、细针活检、外泌体、微透析液、支气管肺泡灌洗液、细胞培养基、干血斑、滑液、脑脊液、斑块提取物、尿液、唾液等等的处理指南请联系公司销售获取！

Q1:使用Olink技术进行蛋白质组测序与传统DNA测序的主要区别是什么？

A1:Olink使用NGS作为工具来测量样本中特定蛋白生物标志物的相对浓度。在样本和文库制备过程中，会产生具有独特序列的短DNA片段，每个蛋白生物标志物对应一个序列。测序后，特定DNA序列的reads数量与原始蛋白生物标志物的浓度成正比。