多重细胞因子检测
产品描述
案例解析
结果展示
送样须知
Q&A
①技术介绍
细胞因子作为细胞间信号传导的分子，主要介导和调节免疫应答及炎症反应，通过调节免疫促进与免疫抑制的动态平衡，维持机体免疫系统的稳定。多重细胞因子检测（CBA，Cytometric Bead Array） ，即细胞因子检测技术，是一种基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法，它能够同时对单个样品中的多个指标进行检测。CBA的基本原理近似于ELISA的检测，即利用微小、分散的颗粒捕获液体待测物，并利用流式细胞仪检测类似“三明治”的颗粒——待测物复合体所散发的荧光，从而测定待测物的数量。多重细胞因子检测广泛用于免疫分型、炎症监测、药物评价、疾病机制与临床转化研究。
②技术路线
标曲制备-捕获微球混合-样本与标准品孵育-洗涤与重悬-流式检测-数据分析-结果交付
③产品优势
1.轻松实现多重检测：可同时对一个样本中的多个目的蛋白进行精确定量
2.样本需要量小：仅需要25-50μL样本可进行一次检测
3.更高的灵敏度：分析灵敏度高达pg/mL级，覆盖低丰度因子
4.灵活定制：可按研究方向定制炎症、Th1/Th2/ Th17、肿瘤免疫等组合Panel
5.可检样品丰富：可检测血清、血浆、细胞培养上清、细胞裂解液、组织匀浆、唾液、尿液、脑脊液、关节液、肺泡灌洗液等多种样本类型
④服务内容
样本制备 | 项目内容 | 服务周期 |
细胞原材料获取 | 全血PBMC分离 | 1-3个工作日 |
组织单细胞悬液制备 | 1-3个工作日 | |
多重细胞因子检测 | 胞外因子检测与分析（CBA） | 1-3个工作日 |
淋巴细胞分泌IFN-γ或TNF-α试验（ELISA） | 1-3个工作日 | |
ELISA检测与分析 | 1-3个 | |
整体项目 | 实验设计到数据报告 | 一项一议 |
抑郁症患者的CD4+T淋巴细胞及细胞因子谱
研究背景：
免疫系统功能障碍与抑郁症有关；然而，不同严重程度抑郁症患者 CD4+T 淋巴细胞和细胞因子的具体变化仍不清楚。本研究旨在探究轻度、中度和重度抑郁症患者的免疫学变化，以识别潜在的临床诊断和疾病严重程度评估的生物标志物，并揭示抑郁症相关的免疫学机制。
研究方法：
该项研究共纳入81名抑郁症患者和83名健康对照者。抑郁症患者根据HAMD-24评分分为轻度（28人）、中度（31人）和重度（22人）三组。通过流式细胞术检测外周血中Th1、Th2、Th17和Treg细胞的相对比例和绝对数量；通过细胞因子微球阵列（CBA）技术检测血清中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、IFN-γ和TNF-α的水平。
研究结果：
细胞因子水平的变化：研究发现，随着抑郁症严重程度的增加，血清中IL-4水平逐渐下降，而IL-6水平逐渐上升。IL-4具有免疫调节作用，可以抑制Th1细胞因子的产生，保护大脑免受抑郁影响；而IL-6则能降低神经递质水平，激活系统性免疫炎症反应，促进抑郁症状的发生。
研究结论：
该项研究全面分析了不同严重程度抑郁症患者外周血中CD4+T淋巴细胞亚群和细胞因子的变化，揭示了免疫系统在抑郁症发病机制中的重要作用。IL-4和IL-6作为重要的免疫调节因子，其水平变化与抑郁症严重程度密切相关，有望成为评估疾病进展和治疗效果的新型生物标志物。
参考文献：
Zhang W , Wang C , Fu T ,et al.CD4+T lymphocyte and cytokine profiles in depressive disorders[J].BMC Psychiatry, 2025, 2025(000). DOI:10.1186/s12888-025-07344-8.
多重细胞因子检测送样标准
细胞样本
1.样本类型：贴壁细胞、悬浮细胞、冻存细胞、固定后的细胞；
2.样本数量：检测表面蛋白时，细胞数量为1×106
血液样本
1.样本类型：来源于人或动物（小鼠、大鼠等）的血液样本；
2.样本数量：
①采用裂红的方法检测表面蛋白时，每个样本体积不少于100μL；
②采用裂红的方法检测胞内或核内蛋白指标时，每个样本体积不少于300μL；
③采用密度梯度离心的方法检测表面蛋白时，每个样本体积不少于1mL；
④采用密度梯度离心的方法检测胞内或核内蛋白时，每个样本体积不少于3mL；
在首次送样时，除开检测样本，还需额外提供单个样本体积*n（指标数）的样本量用于检测方案的设置。
组织样本
1.样本类型：来源人或动物（小鼠、大鼠等）的脾脏、淋巴结、肺、皮下瘤等；
2.样本数量：新鲜组织不小于黄豆大小，对于目的细胞含量较低的组织类型，需要根据首次实验评估后的结果，加大样本的送样量。
在首次送样时，除开检测样本，还需额外提供部分组织样本用于检测方案的设置。
其他体液样本
1.样本类型：来源于人或动物（小鼠、大鼠等）的腹水、脑脊液、血清、血浆、细胞培养上清等；
2.样本数量：
①若样本用于细胞水平流式检测，细胞量需满足样本数量要求；
②若样本用于Elisa检测，单个指标所需样本体积需不少于100μL；
③若样本用于液相细胞因子检测，单个试剂盒所需样本体积不少于50μL；
植物样本
1.样本类型：植物叶片、根、茎等。除了待测目标样本，倍性检测须提供同源近亲物种做参照样本。基因组大小检测需提供已知基因组大小的同源近亲物种做参照，也可提供已知且稳定的基因组大小物种做参照，如拟南芥等。
2.样本数量：叶片大小按1cm×1cm评估，大概10片左右。其他类型需至少3g以上新鲜的组织。
样本处理及运输
1.细胞样本
①贴壁细胞：对于贴壁培养的细胞，运送前，需培养瓶内加满细胞培养液，拧紧瓶盖，加冰袋24h内运输至实验室，运输过程做好物理隔离，避免低温产生冰渣。样本运输至实验室时，冰袋未完全化冻；
②悬浮细胞：对于悬浮培养的细胞，运送前，需将培养基中的细胞转移至密封性较好的离心管中，拧紧盖子后，加冰袋24h内运输至实验室，运输过程做好物理隔离，避免低温产生冰渣。样本运输至实验室时，冰袋未完全化冻。不要采取多孔板送样，运输时，容易因为晃动造成孔间污染；
③冻存细胞：对于冻存的活细胞，采用干冰寄送。需保证在样本运输至实验室时，干冰未完全挥发，并完整覆盖样本，样本本身没有融化现象；
④固定后的细胞：对于处理后，需要对细胞及时固定的项目，可以将细胞悬液350g，离心5min，弃上清；加入1mL的4%多聚甲醛固定液，混匀。转移至1.5mL的离心管，室温固定15~20min，400g，离心5min，弃上清；PBS洗涤一次后，用1mL的PBS重悬，混匀，盖紧，加冰袋运输至实验室，运输过程做好物理隔离，避免低温产生冰渣。样本运输至实验室时，冰袋未完全化冻；
2.血液样本
①若样本用于检测表面蛋白，则EDTA和肝素抗凝剂两种都可使用。
②若样本用于胞内或核内蛋白因子检测，则建议使用肝素抗凝剂。
采血后，充分混匀，避免出现凝血的现象。加冰袋24h内运输至实验室，运输过程做好物理隔离，避免低温产生冰渣。样本运输至实验室时，冰袋未完全化冻；
3.组织样本
①组织样本采集后，对于体积较大的组织，需将组织剪成黄豆大小的块状，用PBS或生理盐水冲洗后，快速转移至组织保存液中，需保证组织保存液完全浸润组织样本。
②加冰袋48h内运输至实验室，运输过程做好物理隔离，避免低温产生冰渣。样本运输至实验室时，冰袋未完全化冻，样本完全浸润在组织保存液中。
4.其他体液样本
①若直接送检腹水或脑脊液样本，需在样本采集后，4h内运送至我方实验室。加冰袋运输，运输过程做好物理隔离，避免低温产生冰渣。样本运输至实验室时，冰袋未完全化冻。
②若直接送检血清、血浆、细胞培养上清等，在收集样本后，需及时将样本放在-80℃冰箱中冻存。采用干冰寄送，需保证在样本运输至实验室时，干冰未完全挥发，并完整覆盖样本，样本本身没有融化现象；
5.植物样本
①样本采集后，需尽快用打湿的纸包裹，自封袋封装，并在袋子上做好对应的标记；
②若为寄生培养的植物，建议带盆整株送检；加冰袋运输，运输过程做好物理隔离，避免低温冻上植物样本。样本运输至实验室时，冰袋未完全化冻。
Q1：什么是CBA技术？它与传统ELISA有何不同？
A1：CBA技术是将流式细胞术与免疫检测相结合的平台。它使用一系列荧光强度或大小可区分的微球，每种微球包被有特定细胞因子的捕获抗体。将这些微球混合后与待测样本孵育，样本中的目标细胞因子会与相应微球结合，随后加入带有荧光标记的检测抗体形成“三明治”复合物。通过流式细胞仪分析，根据微球的编码信号区分细胞因子种类，根据荧光强度定量浓度。
与ELISA相比：CBA的通量更高，可同时检测多达几十种因子；样本需求量少（仅需25-50μL）；检测动态范围更宽，且效率更高。
Q2：如何正确地稀释标准品？
A2：标准品通常为高浓度冻干粉，复溶后需充分涡旋混匀并静置，使其完全溶解。随后进行严格倍比稀释（如1:2、1:4、1:8……），通常包括8-10个浓度点。稀释时务必使用专用的标准品稀释液，并更换枪头以防止交叉污染。
Q3：导致标准曲线拟合度差（R² < 0.99）的原因有哪些？
A3：标准曲线是定量的基准，拟合度差通常源于操作问题。一是稀释不准确：倍比稀释时涡旋不充分或移液误差大，导致浓度梯度失真。二是标准品降解：标准品复溶后反复冻融，或未按规定保存导致活性下降。三是信号饱和：最高浓度点的荧光信号超出了检测器的线性范围。四是洗涤不充分：非特异性结合导致背景升高，干扰了低浓度点的准确性。
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